IMViC test Indoltest Citraattest

De IMViC test is een korte bonte rij met 4 biochemische testen voor de identificatie (onderscheid maken, op naam brengen) van de coliforme enterobacteriën die allemaal lactose vergisten.

Op deze manier wordt Escherichia coli , indicator voor faecale besmetting, onderscheiden van Enterobacter en Citrobacter.

I= Indoltest
M= Methylroodtest
V= Voges Proskauertest
C= Citraattest

Test:
Indole test	Methyl red test	Voges-Proskauer test	Citraat test
Test op Eigenschap:
tryptofanase door aantonen van indol, een splitsingsproduct	Gemengd zure gisting: Veel zuurvorming, veel meer dan bij butaandiolgisting	Butaandiolgisting Test op acetoine tussen product butaandiolgisting.	Groei op citraat als enige koolstof bron
voedingsbodem
Trypton bouillon 1% trypton 20 minuten 120ºC pH 7,0 porties van 5 ml 20 minuten 120ºC	MR-VP bouillon K2HPO4: 0,5% Pepton :5% Glucose:0,5% apart steriliseren pH 7,0 porties van 5 ml 20 minuten 120ºC	MR-VP bouillon K2HPO4: 0,5% Pepton :5% Glucose:0,5% apart steriliseren pH 7,0 porties van 5 ml 20 minuten 120ºC	Simmons citraatagar Kant en klaar medium , zie oxoid, etiket op pot Schuine buizen of platen gieten 20 minuten 120ºC
reagens
Kovacs reagens 1.Voeg 25ml of geconcentreerd HCl toe aan 75ml of Amyl alcohol, 2.los 5g of para dimethylamino-benzaldehyde in oplossing uit stap 1 Bewaar in de koelkast	Methylrood oplossing 40 mg methylrood oplossen in 60 ml 96% ethanol en met demiwater aanvullen tot 100ml.	α-naftol en KOH 5% alcoholische naftoloplossing :los de benodigde hoeveelheid naftol op in ethanol, bewaar het flesje met de oplossing donker en koel 40% KOH oplossing,	geen
werkwijze
Ent de te onderzoeken stammen elk in 5 ml tryptonwater. Neem een controlebuis mee. Incubeer 24 uur bij 37ºC. Voeg na incubatie aan de culturen en de controle enkele druppels Kovac's reagens toe. Eventueel gevormd indol reageert met Kovac's reagens onder vorming van een rode kleurstof.	Reageer na 48 uur en 72 uur incubatie op zuurvorming door aan een gedeelte van de cultuur een druppel methylrood oplossing tot te voegen. Een rode kleur wijst dus op de vorming van grote hoeveelheden zuur(=+).	Voeg na 48 uur en na 72 uur aan 1 ml van de cultuur toe 0,75ml 5% alcoholische naftoloplossing en 0,2 ml 40% KOH oplossing. Schud grondig. Na enkele minuten vindt indien acetoïne aanwezig is een kleuromslag naar rood plaats.	Ent de te onderzoeken stam dun op een plaat of buis met Simmons Citraatagar. Incubeer bij 37ºC. Beoordeel na 48 uur op kleuromslag naar blauw wat wijst op citraat verbruik, waardoor de pH hoger wordt.
positief:
Rood bruine ring bovenkant vloeistof	rood (pH lager dan 4,2)	Rood reactieproduct van reagens met acetoine	Groei blauwe kleur
negatief
Geen verandering	Boven ongeveer de pH van 5,5 zal de buis een gelige kleur houden. Geen verandering	Geen verandering	Geen verandering
positieve bacterie
Escherichia coli	Escherichia coli Citrobacter freundii	Enterobacter aerogenes	Enterobacter aerogenes Citrobacter freundii

Soort	Indol	Methyl Rood	Voges-Proskauer	Citraat
Escherichia coli	Positief	Positief	Negatief	Negatief
Citrobacter freundeii	Negatief	Positief	Negatief	Positief
Enterobacter aerogenes	Negatief	Negatief	Positief	Positief